薄层板跑版注意事项

发布者:admin 发布时间:2019-10-24 16:48 浏览次数:

  薄层板,跑版注意事项_中医中药_医药卫生_专业资料。薄层色谱法---跑板 1. 点样 用微量进样器进行点样。点样前,先用铅笔在层析上距末端 2cm 处轻轻画一横线,然后用毛细管 吸取样液在横线上轻轻点样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。

  薄层色谱法---跑板 1. 点样 用微量进样器进行点样。点样前,先用铅笔在层析上距末端 2cm 处轻轻画一横线,然后用毛细管 吸取样液在横线上轻轻点样,点的斑点较小,展开的色谱图分离度好,颜色分明。如果要重新点样,一 定要等前一次点样残余的溶剂挥发后再点样(用电吹风的热风吹干再点) ,以免点样斑点过大。一般斑 点直径大于 2mm,不宜超过 5mm。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干。底线cm,点 间距离为 lcm 左右,样点与玻璃边缘距离至少 lcm,为防止边缘效应, 2.展开 将点了样的薄层板放在盛在有展开剂的展开槽中,由于毛细管作用,展开溶剂在薄层板上缓慢前 进,前进至一定距离后,取出薄层板,样品组分固移动速度不同而彼此分离。 ① 展开室应预饱和。为达到饱和效果,可在室中加入足够量的展开剂,密封室顶的盖。 ② 展开剂一般为两种以上互溶的有机溶剂,并且临用时新配为宜。强烈振摇使混合液充分混匀,放置, 如果分层,取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸,振摇展开缸来配 制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂,会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对 不同的分析任务有不同的要求,尽量达到实验室仪器的最高精确度,比如:取 1ml 的溶剂,应使用 1ml 的单标移液管, ③ 薄层板点样后,应待溶剂挥发完,再放人展开室中展开。 ④ 展开应密闭,展距一般为 8~15cm。薄层板放入展开室时,展开剂不能没过样点。一般情况下,展 开剂浸入薄层下端的高度不宜超过 0.5cm。 ⑤ 展开剂每次展开后,都需要更换,不能重复使用。 (展开缸中得展开剂弃去,密封在容量瓶中得展开 剂可在当天使用) ⑥ 展开后的薄层板用适当的方法,使溶剂挥发完全,然后进行检视。 ⑦ Rf 值一般控制在 0.3~0.8,当 Rf 值很大或很小时,应适当改变流动相的比例。 3.斑点的检出 展开后的薄层板经过干燥后,常用紫外光灯照射或用显色剂显色检出斑点。对于无色组分,在用显色 剂时,显色剂喷洒要均匀,量要适度。紫外光灯的功率越大,暗室越暗,检出效果就越好。 展开分离后,化合物在薄层板上的位置用比移值(Rf 值)来表示。化合物斑点中心至原点的距离与溶剂 前沿至原点的距离的比值就是该化合物的 Rf 值。 注意事项: 一.预饱和分为 2 部分: 1、展开缸的预饱和:在展开之前,使展开剂蒸汽在展开缸内饱和,使展开缸汽液状态达到一定的稳定 状态,此时尚未放薄层板。 2、薄层板的预饱和:在展开缸饱和后,放入已经点样完毕的薄层板,进行饱和,使薄层板整体差异性 减小。具体做法是:在双槽层析玻璃缸内,将其中一个槽内倒入配好的展开剂,另一个槽内放入薄层板,盖 好上面的玻璃盖,这时候就是在预饱和。 关于饱和时间:根据展开剂而定。 1、展开剂组分极性差异不大的且挥发性好的,时间可以短一些,一般 15-20 分钟即可; 2、极性差异大的,且挥发性差异大的,时间要长一些,一般要 30-60 分钟; 3、极性差异大的,且挥发性差异不大的,时间要长一些,一般要 20-30 分钟; 4、极性差异不大,且挥发性差不大的,时间可以短一些,一般要 10-15 分钟; 5、水饱和有机试剂或有机试剂饱和水的,时间一般都比较长,30-60 分钟。 6、另外,大家打开关闭展开缸的速度要快,放板取板的速度也要快,否则预饱和的效果全被你后期的 操作给抹杀了! ! 二.展开室应放在水平、稳定的实验台上,不能有阳光直射,也不能在通风处放置,离开热源,避免温 度波动对分离不利;光敏物质的分离应将展开室置于暗处进行。 三.点样时间不应超过三分钟。硅胶的硅醇基以氢键形式优先吸附水,物理吸附使硅胶的活度降低,影 响了弱极性物质的吸附,化合物的 Rf 值相应地增大。硅胶薄层的吸水速度很快,当用预先经过活化的 薄层板,在点样过程中干燥的薄层会立即吸附空气中的水蒸气,在数分钟内达到平衡,吸附水蒸气的量 决定于点样速度即暴露在空气中的时间和空气的相对湿度。Dallas 指出 0.25mm 厚、20cm× 20cm 的硅胶 薄层板在 50%相对湿度中放置约 3min 就失去活性的一半,而放置 15min 时吸附的水分已达到最大值。 在用相同条件分离同一组化合物得到的结果不能重现时,必须考虑到相对湿度对展开的影响,特别是我 国南北地区湿度相差很大;即使在同一实验室冬夏季节不同湿度也有明显差别,如果不注意湿度的影响 就得不到预期的结果。 展开时的最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性,随溶质和溶剂极性的增加相对湿度的范围也 相应地增大,在用苯作展开剂时,适宜的相对湿度范围很窄,因此湿度对分离的影响十分明显;当用乙 醚为展开剂时,相对湿度在 20%-50%,时均可得到重现的结果;如用氯仿-异丙醇-25%氨水(45:45:10) 为展开剂时,则相对湿度在 20%-80%范围内可得到较好的重现性。这种差别来自展开室中展开剂蒸气有 取代吸附在薄层上水分子的趋势,取代量决定于展开剂蒸气的极性和量;苯为非极性溶剂,其取代作用 小, 因为苯与水极性相差很大, 即使吸附水量有微小的变化也能引起 Rf 值的改变, 甚至在薄层上形成“两 个前沿”而使色谱畸形。而在用极性溶剂如乙醇、甲醇或氨水为展开剂时,则吸附的水分子被大量取代, 原来吸附的水分下降,这时平衡主要决定于高浓度的溶剂蒸气。展开剂极性越大,薄层上吸附水蒸气的 影响越小,因此能在一较宽的湿度范围内得到重现性较好的结果。 四.在点样前薄层板在 110℃活化 30min,然后用另一块玻璃板盖在活化后的薄层上,只有原点区露出 以便点样。总之在相对湿度 50%-60%时,平衡后的硅胶含水量约 13%,多数情况下,是适用的。


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